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1. 亲和层析的基来源理:
在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并团结,如抗原和抗体的识别团结、酶与底物(包括酶的竞争性抑制剂和辅助因子)的识别团结、激素与受体的识别团结,核酸中的互补链、多糖与卵白复合体等等,这种团结既是专一的,又是可逆的。生物分子间的这种团结能力就称为亲和力。
将具有特殊结构的亲和介质制成固相吸附剂安排在层析柱中,当要被疏散的卵白混淆液通过层析柱时,与吸附剂具有亲和能力的卵白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的卵白质由于不被吸附,直接流出,从而与被疏散的卵白质脱离,然后选用适当的洗脱液,改变团结条件将被团结的卵白质洗脱下来,这种疏散纯化卵白质的要领称为亲和层析。
亲和层析具有高选择性、高活性接纳率、高纯度,且纯化历程简朴、迅速,疏散效率高等特点,对疏散含量少少又不稳固的活性物质尤为有用,成为生化工程中疏散提纯生物活性物质的主要要领。但亲和层析必需针对某一疏散工具,制备专一的层析介质和追求层析的稳固条件,因此亲和层析的应用规模受到了一定的限制。
2. 载体的基本要求和选择:
理想的载体应具有下列基本条件:(1)不溶于水,但高度亲水;(2)惰性物质,非特异性吸附少;(3)具有相当量的化学基团可供活化;(4)理化性子稳固;(5)机械性能好,具有一定的颗粒形式以坚持一定的流速;(6)通透性好,最好为多孔的网状结构,使大分子能自由通过;(7)能对抗微生物和醇的作用。
3. 影响层析疏散的主要因素:
影响亲和层析疏散的主要因素有:(1)离子强度,主要影响静电作用和疏水性相互作用;(2)pH值,通过改变配基和卵白质上带电基团的离子化水平对亲和团结爆发影响;(3)抑制氢键形成的物质,如脲和盐酸胍,主要削弱亲和团结作用力中的氢键;(4)温度的改变会使分子和原子的运动强烈水平爆发改变,从而对亲和作用爆发影响;(5)在亲和系统中加入一些离子或螯合剂,也将影响亲和作用力。
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