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凝胶层析
宣布时间:2020-04-27

1. 凝胶层析的基来源理:

       凝胶层析(Gel Chromatography)是使用凝胶层析介质的网状结构 ,凭证分子巨细举行疏散的一种要领。其基来源理是含有差别尺寸巨细的分子进入层析柱后 ,较大的分子不可通过孔道扩散进入凝胶珠体内部 ,而与流动相一起流出层析柱;较小的分子可通过部分孔道 ,更小的分子可通过恣意孔道扩散进入珠体内部。这种颗粒内部扩散的效果 ,使小分子向柱下的移动减慢 ,从而样品凭证分子巨细的差别依次按一定顺序从柱内流出 ,一样平常是大分子先流出来 ,小分子后流出来 ,从而抵达疏散的目的。凝胶层析介质像分子筛一样 ,将巨细差别的分子举行疏散 ,因此 ,凝胶层析又叫分子筛层析或称尺寸排阻层析。

       层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质 ,多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质 ,小分子物质能进入其内部 ,流下来速率慢 ,而大分子物质却被扫除在外部 ,下来的速率快 ,当混淆溶液通过凝胶过滤层析柱时 ,溶液中的物质就按差别分子量筛脱离了。

2. 凝胶层析的优点:

       疏散条件温顺 ,可在多种条件下事情。凝胶层析介质为不带电荷的惰性物质 ,不与溶质分子爆发作用 ,疏散条件温顺 ,卵白质维持原结构 ,故不易变性 ,可坚持被疏散因素的理化性子。凝胶层析可在相当广的温度规模内举行操作 ,因此更适用于某些不稳固的分子 ,尤其是那些对pH值、金属离子浓度敏感的、对情形要求苛刻的生物分子的疏散。为知足卵白质的特殊要求 ,可以在多种条件下举行疏散 ,如在高离子强度、低离子强度 ,以及脲、盐酸胍保存的情形下举行疏散。

       卵白质接纳率高。目的卵白质的接纳率很高 ,险些可达100% ,且实验重现性好。

       应用面普遍。事情规模广 ,疏散分子量的笼罩面大 ,可疏散相对分子质量从几百到数百万的分子 ,尤其适用于活性大分子的疏散。凝胶层析对情形的要求不严酷 ,可以在低温下操作 ,也可在37℃下举行疏散 ,还可以凭证卵白质的需求选用多种缓冲液。

       装备简朴 ,易于操作。凝胶层析的装备简朴 ,易于操作 ,周期短 ,每次疏散之后介质不需再生 ,故可一连使用 ,有的凝胶层析柱可一连应用几百次甚至上千次。

3. 凝胶层析的应用:

       脱盐:高分子(如卵白质、核酸、多糖等)溶液中的低分子量杂质 ,可以用凝胶层析法除去 ,这一操作称为脱盐。本法脱盐操作轻盈、快速、卵白质和酶类等在脱盐历程中不易变性。

       疏散提纯:凝胶层析法已普遍用于酶、卵白质、氨基酸、多肽、多糖、核酸、激素、疫苗、生物碱等物质的疏散提纯。凝胶对热原有较强的吸附力 ,可用往复除无离子水中的致热原制备注射用水。

       分子量的测定:用一系列已知分子量的标准品放入统一凝胶柱内 ,在统一条件下层析 ,纪录每一分钟因素的洗脱体积 ,并以洗脱体积对分子量的对数作图 ,在一定分子量规模内可得一直线 ,即分子量的标准曲线。测定未知物质的分子量时 ,可将此样品加在测定了标准曲线的凝胶柱内洗肿后 ,凭证物质的洗脱体积 ,在标准曲线上查出它的分子量。

       高分子溶液的浓缩:通常将凝胶层析介质干胶投入到稀的高分子溶液中 ,这时水分和低分子量的物质就会进入凝胶粒子内部的孔隙中 ,而高分子物质则排阻在凝胶颗粒之外 ,再经离心或过滤 ,将溶胀的凝胶疏散出去 ,就获得了浓缩的高分子溶液。

       凝胶层析因其条件温顺 ,操作简朴 ,卵白质接纳率高及重现性好等特点 ,在生物化学、医学及分子生物学等方面获得普遍的应用 ,如卵白质、酶、多肽、抗体及激素的疏散纯化 ,分子量测定及多聚体研究 ,临床剖析 ,热原去除及药物制备等 ,在轻工食物等领域也获得极为普遍的应用。



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